猪MyD88基因干扰重组慢病毒载体的构建、病毒包装及效果评价

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.04.021

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (4): 657-664.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.04.021

猪MyD88基因干扰重组慢病毒载体的构建、病毒包装及效果评价

訾臣¹，夏日炜¹，殷学梅¹，喻礼怀¹，朱国强²，吴圣龙^1*，包文斌^1*

（1.扬州大学动物科学与技术学院，江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室，扬州 225009；2.扬州大学兽医学院，扬州 225009）

收稿日期:2014-07-28 出版日期:2015-04-23 发布日期:2015-04-23
通讯作者: 包文斌(1974-)，男，博士，研究员，主要从事猪遗传育种研究，E-mail：wbbao@yzu.edu.cn；吴圣龙(1963-)，男，博士，研究员，主要从事猪遗传育种研究，E-mail：slwu@yzu.edu.cn
作者简介:訾臣(1987-)，男，山东临沂人，博士生，主要从事猪抗病育种研究，E-mail：zchandy@163.com
基金资助:
国家自然科学基金（31172183；31140027）；转基因生物新品种培育科技重大专项（2014ZX0800601B）；江苏省科技支撑计划(BE2012330；BE2013345；BE2014357)；江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)

Construction and Packaging of Recombinant Lentivirus Interference Vector Specific to Porcine MyD88 Gene and the Evaluation of the Corresponding Lentivirus

ZI Chen¹，XIA Ri-wei¹，YIN Xue-mei¹，YU Li-huai¹，ZHU Guo-qiang²，WU Sheng-long^1* ，BAO Wen-bin^1*

(1.Animal Science and Technology College，Yangzhou University，Key Laboratory for Animal Genetics， Breeding，Reproduction and Molecular Design of Jiangsu Province，Yangzhou 225009，China；2.College of Veterinary Medicine，Yangzhou University，Yangzhou 225009，China)

Received:2014-07-28 Online:2015-04-23 Published:2015-04-23

摘要/Abstract

摘要：

髓性分化因子88 (MyD88) 作为TLRs/IL-1R信号通路中重要的接头蛋白，在免疫应答和疾病防御中起重要作用，作者拟通过慢病毒介导的RNA干扰技术获得MyD88基因沉默的猪小肠上皮细胞，为致病菌引起肠道疾病机制研究提供有效模型。共构建4个靶向猪MyD88基因的shRNA表达载体和1个MyD88基因高表达载体，通过实时荧光定量PCR方法鉴定瞬时共转染293细胞中MyD88基因转录水平，筛选获得干扰猪MyD88基因效率最高的shRNA表达载体，将其包装成慢病毒载体，用于建立MyD88基因稳定沉默的猪小肠上皮细胞。最终成功获得MyD88基因沉默效率达到69.3%的小肠上皮细胞，达到基因功能分析的要求。MyD88基因稳定沉默猪肠上皮细胞的获得，为猪肠道病原微生物所引起的TLRs/IL-1R信号通路作用机制的研究提供了宝贵材料。

Abstract:

Myeloid differentiation factor 88 (MyD88)，an important adaptor protein in TLRs/IL-1R signaling pathways，plays an important role in immune response and disease prevention.This study intends to obtain pig small intestinal epithelial cells in which MyD88 gene is silent mediated by lentiviru，as an effective model for analyzing molecular mechanism of intestinal disease caused by pathogenic bacteria.In this study，four plasmid expression vectors were constructed，which coded shRNAs against pig MyD88 gene，and the over-expression vector coding MyD88 gene was also constructed.By the method of real-time fluorescent quantitative PCR，the level of MyD88 gene in the cotransfected 293 cells was detected.The highest efficiency vector was adopted and packaged into lentiviral vector to obtain pig small intestinal epithelial cells with silent MyD88 gene.The IPEC-J2 cell was obtained in which the MyD88 mRNA expression was reduced by 69.3%，meeting the requirement for gene function analysis.The obtained pig intestinal epithelial cell with stable MyD88 gene silencing provides important material for mechanism research of TLRs/IL-1R signal pathway caused by pathogenic microorganisms in pig intestines.

中图分类号:

S852.2

訾臣，夏日炜，殷学梅，喻礼怀，朱国强，吴圣龙，包文斌. 猪MyD88基因干扰重组慢病毒载体的构建、病毒包装及效果评价[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(4): 657-664.

ZI Chen，XIA Ri-wei，YIN Xue-mei，YU Li-huai，ZHU Guo-qiang，WU Sheng-long，BAO Wen-bin. Construction and Packaging of Recombinant Lentivirus Interference Vector Specific to Porcine MyD88 Gene and the Evaluation of the Corresponding Lentivirus[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(4): 657-664.

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猪MyD88基因干扰重组慢病毒载体的构建、病毒包装及效果评价

Construction and Packaging of Recombinant Lentivirus Interference Vector Specific to Porcine MyD88 Gene and the Evaluation of the Corresponding Lentivirus

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